А.А. Пометун, П.Д. Паршин, Н.П. Галаничева, И.В. Упоров, Д.Л. Атрошенко, С.С. Савин, В.И. Тишков

Влияние последовательности HIS₆ на свойства формиатдегидрогеназы из бактерий Pseudomonas sp. 101

NAD(P)⁺-зависимая формиатдегидрогеназа (ФДГ, КФ 1.2.1.2.) активно используется в процессах хирального синтеза с участием оксидоредуктаз для регенерации восстановленного кофактора. Для успешного использования ФДГ в таких системах необходим простой и быстрый способ очистки фермента. В качестве такого способа широко используется металло-хелатная хроматография, для которой необходимо наличие нескольких (шести и более) остатков гистидина на N- или C-конце аминокислотной последовательности фермента. Зачастую такое добавление остатков гистидина оказывает влияние на свойства ферментов. Проведено моделирование структур ФДГ из бактерий Pseudomonas (PseFDH) с разным положением гистидиновой метки. Показано, что наиболее оптимально вводить последовательность His₆ на N-конец, а не на С-конец фермента. Методом направленного мутагенеза получены His₆-PseФДГ дикого типа и два NADP⁺-специфичных мутанта. Новые ферменты выделены в одну стадию практически в гомогенном состоянии. Сравнение их свойств с таковыми для исходных ферментов показало, что введение His-tag не влияет на каталитические свойства и слабо сказывается на термостабильности NADP⁺-специфичных мутантов.
Ключевые слова: формиатдегидрогеназа, Pseudomonas sp.101, аффинная хроматография, каталитические свойства, температурная стабильность, His-tag.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2020, том 61, № 4, стр. 317-325