В.Ю. Кислицин, А.М. Чулкин, И.Г. Синельников, А.П. Синицын, А.М. Рожкова

Экспрессия нуклеазы Cas9 комплекса CRISPR/Cas системы редактирования генома в мицелиальном грибе Penicillium Verruculosum

Ген cas9 бактерииStreptococcus pyogenes, кодирующий нуклеазу Cas9 системы CRISPR/Cas второго класса, был экспрессирован в мицелиальном грибе Penicillium verruculosum под контролем конститутивного аутологичного промотора гена gpdA глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназы, который был впервые клонирован и секвенирован в представленной работе. Функциональность gpdA промотора была подтверждена экспрессией гетерологичного гена β-глюкозидазы Aspergillus niger в P. verruculosum. Относительное количество копий и уровень экспрессии гена cas9 в рекомбинантных штаммах был определен методом ПЦР в реальном времени. Для детекции и определения локализации нуклеазы Cas9 в клетках гриба P. verruculosum была получена химерная форма Cas9 и флюоресцентного белка eGFP, добавленного на С-конец нуклеазы. Флюоресцентная микроскопия растущего мицелия подтвердила внутриклеточную экспрессию химерной конструкции в клетках рекомбинантных штаммов.
Ключевые слова: геномное редактирование, Penicillium verruculosum, gpdA промотор.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2020, том 61, № 4, стр. 309-316