А.А. Алексеева, А.С. Петров, В.В. Федорчук, Е.А. Федорчук, Т.А. Осипова, В.И. Тишков
Изменение величины изоэлектрической точки
формиатдегидрогеназы методом рационального дизайна
Реферат
Для расширения рН-оптимума стабильности NAD+-зависимой
формиатдегидрогеназы (ФДГ, КФ 1.2.1.2) из бактерии Pseudomonas sp. 101
(PseФДГ) методом направленного мутагенеза получены четыре мутантных фермента с
заменами Lys112Pro, Lys231Ala, Lys231Ser и Lys317Asn. Выбор положений и типа
аминокислоты для замены был сделан на основе выравнивания аминокислотных
последовательностей ФДГ из разных источников, а также анализа трехмерной
структуры PseФДГ. Для всех полученных мутантных форм проведено изучение
кинетических свойств и температурной стабильности. Показано, что замены в
положениях 112 и 231 приводят к небольшому улучшению кинетических свойств, в то
время как для мутанта Lys317Asn наблюдалось снижение сродства к коферменту.
Изучение температурной стабильности полученных ферментов показало, что замены в
положениях 112 и 231 приводят лишь к небольшой дестабилизации фермента, а
замена Lys317Asn вызывает значительную потерю в термостабильности. Для всех
полученных мутантных форм наблюдалось снижение изоэлектрической точки примерно
на 0,1 единицу.
Ключевые слова: формиатдегидрогеназа, Pseudomonas sp.101,
белковая инженерия, рациональный дизайн, изоэлектрическая точка.
Полный текст статьи в формате PDF
Вестник Московского Университета.
Химия 2014, том 55, № 2, стр. 98-105
Copyright (C) Химический факультет МГУ, 2014
|