В.Голубев, Н.В.Комарова, О.Е. Скиргелло, Т.А. Осипова, В.И. Тишков
Оптимизация методики
определения каталитических параметров оксидазы D-аминокислот в реакции
окисления цефалоспорина с с помощью ВЭЖХ
Реферат
Половину общего количества цефалоспориновых антибиотиков
разных поколений производят из 7-аминоцефалоспорановой
кислоты, которую до недавнего времени получали с помощью органического синтеза.
На смену органическому синтезу постепенно приходит двустадийный
биокаталитический процесс, на первой стадии которого происходит ферментативное
окисление природного антибиотика цефалоспорина С под действием оксидазы
D-аминокислот (DAAO). Стандартная методика определения активности DAAO основана
на определении концентрации выделяющегося пероксида с помощью сопряженной
реакции с пероксидазой из корней хрена. Поскольку в процессе окисления
цефалоспорина С пероксид водорода вступает в неферментативную реакцию с
промежуточным продуктом, то для определения активности фермента наиболее
корректно следить за убылью субстрата с помощью высокоэффективной жидкостной
хроматографии (ВЭЖХ). В данной работе мы провели оптимизацию методики
определения концентрации цефалоспорина С с помощью ВЭЖХ в реакционной
смеси в процессе его окисления оксидазой D-аминокислот. Используя разработанную
методику, мы определили каталитические параметры для DAAO из дрожжей Trigonopsis
variabilis дикого типа и одной из ее мутантных форм в реакции окисления
цефалоспорина C.
Ключевые слова: оксидаза D-аминокислот, Trigonopsis variabilis, цефалоспорин С, каталитические параметры, высокоэффективная жидкостная хроматография.
Полный текст статьи в формате PDF
Вестник Московского Университета.
Химия 2014, том 55, № 2, стр. 93-97
Copyright (C) Химический факультет МГУ, 2014
|