В.Г. Григоренко, М.Ю. Рубцова, Е.В. Филатова, И.П. Андреева, Е.А. Мистрюкова, А.М. Егоров

Клонирование, экспрессия гена металло-Β-лактамазы NDM-1 и изучение каталитических свойств рекомбинантного фермента

Создана система экспрессии гена бета-лактамазы NDM-1 в клетках E. coli, обеспечивающая синтез рекомбинантного белка в растворимой активной форме. Разработан метод выделения и очистки рекомбинантного фермента. Выход гомогенного препарата белка составил 10–15 мг с 1 л культуры клеток. Определены каталитические параметры рекомбинантной бета-лактамазы NDM-1 для субстратов ампициллин (K_M = 185 мкM, k_кат = 585 с^–1) и меропенем (K_M = 85 мкM, k_кат = 160 с^–1), которые согласуются с литературными данными. Впервые определены каталитические параметры для субстрата CENTA (K_M = 14 мкM, k_кат = 290 с^–1).
Ключевые слова: рекомбинантная бета-лактамаза NDM-1, ампициллин, меропенем, CENTA, кинетические параметры.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2016, том 57, № 2, стр. 75-81