Г.Ю. Ломакина, А.Е. Безруких, Н.Н. Угарова

Влияние желатины на свойства люциферазы светляков Luciola mingrelica

Работа посвящена изучению АТФ-реагента, который содержит мутантную термостабильную люциферазу светляков Luciola mingrelica, люциферин, MgSO₄, компоненты буферного раствора и стабилизаторы и широко используется для определения нано- и пикомолярных концентраций аденозин-5¢-фосфата (АТФ) в различных биологических образцах. Проведена оценка активности, стабильности и аналитических характеристик АТФ-реагента в растворе в присутствии и в отсутствие 5%-й желатины и в желатиновом геле. При концентрации желатины 5% и температуре ³30° получен раствор АТФ-реагента, а ниже 30° происходит гелеобразование. Растворы АТФ-реагента изучены при 30°, а тонкие желатиновые пленки с АТФ-реагентом – при 22°. Добавки желатины несколько снижают активность и стабильность люциферазы. Чувствительность определения АТФ (выше 0,96) не зависела от присутствия желатины и агрегатного состояния дисперсной системы. Пределы обнаружения составляли 2×10^–12, 7×10^–13, 7×10^–14 М АТФ при использовании АТФ-реагента в желатиновых пленках и в растворе в присутствии 5%-й желатины и в ее отсутствие соответственно. Показано, что хранение АТФ-реагента при 22° в желатиновом геле не только сохраняет ферментативную активность, но и защищает фермент от бактериального загрязнения, следствием чего является потеря активности люциферазы.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2012, том 53, № 1, стр. 12-17