А.М. Луговая, В.Г. Григоренко

Изучение каталитических свойств рекомбинантной b-лактамазы класса А TEM-1 и ее ингибирования сульбактамом, тазобактамом и клавулановой кислотой

Изучен гомогенный препарат рекомбинантного фермента b-лактамазы TEM-1 класса А, используемый в различных экспрессионных конструкциях в качестве гена-маркера для обеспечения устойчивости клеток к ампициллину; определены его кинетические параметры с использованием хромогенного субстрата CENTA (K_М = 22 мкM, V = 0,39 мкM/с, k_кат = 31,2 с^-1, k_кат/K_М =1,4 мкM^-1×c^–1). На основании сравнения определенного в работе значенияK_М с литературными данными для нативного фермента (K_М = 70 мкM) показано, что рекомбинантный фермент в 3 раза более специфичен по отношению к субстрату CENTA. Установлен конкурентный тип ингибирования рекомбинантной b-лактамазы для сульбактама, тазобактама, клавулановой кислоты. Впервые определены значения констант ингибирования по субстрату CENTA для сульбактама, тазобактама и клавулановой кислоты (K_{I (сульбактам)} = 0,43 мкM, K_{I (тазобактам)} = 0,041 мкM, K_{I (клавулановая кислота)} = 0,046 мкM). Показано, что наиболее эффективными ингибиторами для рекомбинантной b-лактамазы являются тазобактам и клавулановая кислота, причем их ингибирующее действие можно считать одинаковым.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2010, том 51, № 3, стр. 174-177