|
Коллективная монография представляет одно из
направлений исследований, развивающихся на кафедре химической
энзимологии в лаборатории экобиокатализа Химического факультета
МГУ имени М.В. Ломоносова. В монографии представлены результаты
самих авторов и изложены подходы к решению одной из актуальных
проблем, связанных с необходимостью снижения токсичности
различных сред, которые контаминированы микроскопическими
грибами и их высокотоксичными метаболитами, вызывающими тяжелые
заболевания у человека и животных, которые могут сопровождаться
летальными исходами. Микотоксины, синтезируемые различными
микроскопическими грибами, обладают высоким уровнем нейро-,
гепато-, нефро-, иммунотоксичности, вызывают развитие онкологии.
Поскольку микотоксины преимущественно накапливаются в
сельскохозяйственном сырье и животноводческой продукции, в
кормах для животных и продуктах пищевой промышленности, то
попадание их в конечном счёте в организм человека поднимает
вопросы необходимого обеспечения химической безопасности.
Применение различных методов детоксификации, и, в первую
очередь, разработка природоподобных процессов для нейтрализации
токсичных эффектов от воздействия микотоксинов с параллельным
быстрым контролем результативности предпринимаемых действий,
стоят на переднем плане в научных исследованиях и разработках,
ориентированных на практическое применение. Материалы,
представленные в монографии, раскрывают возможность развития
таких методов на основе использования различных ферментов -
биокатализаторов трансформации и детоксификации микотоксинов в
смесях, находящихся, в том числе, в средах со сложным химическим
составом. Книга будет полезной для студентов, аспирантов,
научных сотрудников, специализирующихся в области
сельскохозяйственной, медицинской, экологической, промышленной
энзимологии, биокатализа, молекулярной биологии, биотехнологии,
биоинформатики, пищевой промышленности.
Авторы монографии:
Ефременко Е.Н., Лягин КВ., Степанов
Н.А., Маслова О.В.,
Сенько О.В., Асланлы А.Г., Домнин М.В.
|
Рецензент:
профессор, доктор биологических наук
Завьялова Наталья Васильевна (27 НЦ МО РФ) |
СОДЕРЖАНИЕ
| Предисловие |
|
8 |
| ЧАСТЬ 1. ФЕРМЕНТЫ В
АНАЛИЗЕ МИКОТОКСИНОВ |
|
11 |
| Глава 1. Проблема микотоксинов и
подходы к её решению |
|
11 |
| 1.1. Физические и
химические методы детоксификации микотоксинов |
|
14 |
| 1.2. Биологические
методы детоксификации микотоксинов |
|
17 |
| Глава 2. Иммобилизованные
люминесцентные бактерии в обнаружении микотоксинов |
|
27 |
| 2.1.Люминесцентные
бактерии в условиях дискретногои проточного анализа
микотоксинов |
|
30 |
| 2.2.Люминесцентные
клетки для оценки токсичности реакционной среды,
полученной после гидролиза зеараленона |
|
33 |
| Глава 3. Использование холинэстераз в
сравнении с им мобилизованными люминесцентными
фотобактериями для оценки эффективности
ферментативного гидролиза микотоксинов |
|
41 |
| 3.1. Количественный
экспресс-анализ микотоксинов в жидких средах с участием
холинэстераз или иммобилизованных биолюминесцентных
клеток фотобактерий |
|
44 |
| 3.2. Оценка с
использованием клеток фотобактерий токсичности
реакционных сред, полученных после гидролиза зеараленона
ферментом His6-OPH при разных значениях рН |
|
50 |
| 3.3. Контроль
биодеградации зеараленона в кормовой зерносмеси под
действием фермента His6-OPH с применением
клеток фотобактерий |
|
52 |
| Глава 4. Применение фотобактерий в
качестве биоиндикаторов при скрининге и выборе
ферментов, детоксифицирующих различные микотоксины |
|
58 |
| 4.1. Реакция
биолюминесцентных клеток на присутствие разных
микотоксинов |
|
60 |
| 4.2. Исследование
взаимодействий между микотоксинами и ферментами in
silico |
|
63 |
| 4.3. Биолюминесцентный
анализ результатов ферментативного воздействия на
микотоксины |
|
67 |
| Глава 5. Ферментативное определение
и/или деградация микотоксинов в кислой среде |
|
74 |
| 5.1. Моделирование
взаимодействий микотоксиновс ферментами |
|
77 |
| 5.2.Воздействие
ферментов на микотоксины in vitro |
|
82 |
| ЧАСТЬ 2. ФЕРМЕНТНАЯ
ДЕТОКСИФИКАЦИЯ МИКОТОКСИНОВ |
|
94 |
| Глава 6. Механизмы действия ферментов,
модифицирующих микотоксины с целью их детоксификации |
|
94 |
| 6.1. Афлатоксины |
|
97 |
| 6.2. Стеригматоцистин |
|
110 |
| 6.3. Глиотоксин |
|
112 |
| 6.4. Зеараленон |
|
115 |
| 6.5. Охратоксины |
|
121 |
| 6.6. Патулин |
|
124 |
| 6.7. Фумонизины |
|
129 |
| 6.8. Эргоалкалоиды |
|
130 |
| 6.9. Трихотецены |
|
134 |
| 6.10.Множественная
деградация микотоксинов |
|
142 |
| Глава 7. Детоксификация микотоксинов с
использованием фермент-содержащих нанокомплексов |
|
166 |
| 7.1. Гидролиз
микотоксинов под действием His6-OPH |
|
167 |
| 7.2. Влияние сорбентов
на эффективность ферментативного удаления микотоксинов |
|
170 |
| 7.3. Гидролиз
микотоксинов нанокомплексами, иммобилизованными на
волокнистых материалах |
|
173 |
| Глава 8. His6-OPH в реакциях
деградации различных веществ, включая микотоксины, в
условиях применения разнообразных носителей и
сорбентов |
|
182 |
| 8.1. Разнообразные
носители для стабилизации His6-ОРН -
фермента, гидролизующего разные микотоксины |
|
184 |
| 8.2.Сравнительный анализ
биокатализаторов на основе
иммобилизованного/стабилизированного His6-OPH |
|
202 |
| 8.3. Совмещение
сорбентов и стабилизированных форм His6-OPH в
процессе детоксификации микотоксинов |
|
205 |
| Глава 9. Деградация микотоксинов в
смесях комбинированными белковыми
нанобиокатализаторами: in silico, in vitro и
in vivo |
|
216 |
| 9.1. Скрининг ферментов,
способных разрушать микотоксины |
|
217 |
| 9.2. Моделирование
фермент-полиэлектролитных комплексов |
|
229 |
| 9.3. Деградация
микотоксинов и анализ остаточной цитотоксичности |
|
232 |
| 9.4. Разложение
микотоксинов в кормах для животныхи эксперименты in
vivo |
|
235 |
| Глава 10. Разрушение микотоксинов в
отходах птицеводства в анаэробных условиях в ходе
метаногенеза, катализируемого искусственными
микробными консорциумами |
|
250 |
| 10.1. Микотоксины в
птичьем помете |
|
254 |
| 10.2. Перспективы и
особенности процесса детоксикации микотоксинов в
подстилке методом щелочной предобработки |
|
258 |
| 10.3. Ферменты как
деструкторы микотоксинов в птичьем помете в условиях
метаногенеза |
|
263 |
| 10.4. Ожидаемый
потенциал в разработке анаэробных биокатализаторов для
АС птичьего помета, загрязненного микотоксинами |
|
269 |
Предисловие
Данная монография является коллективным трудом,
который представляет научные результаты исследований
теоретического и прикладного характера, выполненные при
поддержке Российского научного фонда. Они проведены авторами,
являющимися сотрудниками научно-исследовательской лаборатории
Экобиокатализа кафедры химической энзимологии Химического
факультета МГУ имени М.В. Ломоносова, основное направление
деятельности которой напрямую связано с изучением свойств и
механизмов действия различных ферментов при решении разных
экологически ориентированных задач.
Проблема загрязнения микотоксинами,
синтезируемыми различными клетками мицелиальных грибов,
различного сельскохозяйственного сырья, кормов и продуктов
питания в современном мире становится все более тревожной,
поскольку наряду с разработкой и совершенствованием методов
обнаружения микотоксинов накапливаются сведения об их наличии в
различных анализируемых образцах. При этом весьма актуальной
является разработка экспрессных методов анализа микотоксинов,
которые могли бы сократить сроки и стоимость выявления
присутствия микотоксинов в разных средах и материалах. Новые
эффективные методики крайне необходимы как для отбора
потенциальных детоксификаторов микотоксинов, так и для оценки
эффективности их действия в различных условиях.
Сегодня для снижения токсичности
сельскохозяйственного сырья и кормов для животных, загрязненных
микотоксинами, развиваются различные физические, химические и
биологические методы. Наиболее мягкими условиями их реализации
характеризуются именно биокаталитические методы трансформации
микотоксинов, которым в данной монографии и отдается основное
внимание.
Ряд микроорганизмов и некоторые растения
обладают биохимическими механизмами защиты от токсического
воздействия микотоксинов. Превращение микотоксинов в клетках
этих живых организмов катализируется рядом ферментов, среди
которых идентифицированы оксидазы, пероксидазы, лактонгидролазы,
лакказы, липазы, амидазы, аминотрансферазы и др. Сегодня
получены рекомбинантные варианты этих ферментов, в том числе их
фьюжен-ферменты с использованием современных генетических
методов исследования. Ферменты являются основой для разработки
новых эффективных материалов с дезактивирующей активностью в
отношении различных микотоксинов. Изучение и знание свойств
ферментов, источников их выделения и специфики действия, а также
продуктов реакций, катализируемых ими, составляют современную
научную базу для создания новых эффективных средств защиты от
воздействия высоко токсичных микотоксинов (сорбентов, тканей и
т. д.).
Особый интерес представляют разработанные
нанобиокатализаторы в виде комбинаций ферментов,
стабилизированных в полиэлектролитных комплексах с
поли(аминокислотами) и другими соединениями, обладающими
антифугнальными свойствами. Их применение позволяет одновременно
разрушать микотоксины, в том числе в смесях, а также подавлять
рост грибных клеток, синтезирующих микотоксины. Они безопасны и
перспективны для применения, как в сельском хозяйстве, так и в
пищевой промышленности. Для отбора наиболее эффективно
действующих комбинаций ферментов-деструкторов микотоксинов и их
партнеров по детоксифицирующим и дезинфицирующим вариантам
активно используются компьютерные методы анализа межмолекулярных
взаимодействий.
Сегодня для снижения токсичного воздействия
микотоксинов на животных в их корма добавляют различные
сорбенты. Часть микотоксинов выводится из организма с этими
сорбентами. В результате образуются объемные отходы
животноводства, содержащие смеси микотоксинов. Известно, что
частично снизить исходную концентрацию микотоксинов удается в
процессе анаэробной конверсии загрязненных субстратов. И это
одна из тех тематик, которые являются актуальными и освещаются в
этой монографии.
В монографии представлен анализ работ по
разрушению микотоксинов под действием ферментов, присутствующих
в клетках анаэробных консорциумов, катализирующих метаногенез
различных отходов. Обсуждается возможность улучшения
функционирования анаэробных искусственных консорциумов при
детоксикации микотоксинов в птичьем помете. Особое внимание
уделено возможности эффективного функционирования микробных
ферментов, катализирующих детоксикацию микотоксинов, как на
стадии подготовки птичьего помета к метаногенезу, так и
непосредственно в самом анаэробном процессе. Предварительная
щелочная обработка птичьих экскрементов перед переработкой в
анаэробном реакторе рассмотрена с позиций эффективного снижения
концентрации микотоксинов в отходах.
Поскольку синтез и секреция грибами
микотоксинов является одним из важнейших средств их собственной
защиты и выживания при конкуренции с другими живыми объектами,
то нейтрализация действия микотоксинов является, таким образом,
одним способов супрессии микроскопических грибов, ингибирования
их метаболической активности и роста, перехода в формы, более
устойчивые к физико-химическим воздействиям, и в первую очередь,
к антимикробным агентам. Представленные в монографии материалы
раскрывают основные подходы к разрушению средств защиты у клеток
разных микроскопических грибов.
Книга предназначена для широкого круга
специалистов в области химической, инженерной, медицинской,
аналитической и экологической энзимологии, для молодежи, которая
только начинает свой путь в науке, а также для ученых, которые
создают новые направления развития российской науки и видят
дальнейшие перспективы её прогресса на основе достигнутых
результатов в исследовании и применении ферментов в различных
областях (экологии, медицине, создании новых материалов,
сельском хозяйстве, животноводстве, пищевой промышленности,
охране окружающей среды, разработке систем биозащиты).
Редактор -
профессор Е.Н. Ефременко
|