Д.Л. Атрошенко, А.А. Пометун, С.С. Савин, В.И. Тишков

Определение кинетических параметров оксидазы D-аминокислот дрожжей дикого типа и ее мутантов в реакции окисления цефалоспорина С

Окисление цефалоспорина С (CPC) оксидазой D-аминокислот является первой стадией промышленного процесса биокаталитического производства 7-аминоцефалоспорановой кислоты – исходного синтона получения полусинтетических цефалоспориновых антибиотиков. Нами проведено определение кинетических параметров (каталитической константы и константы Михаэлиса) на основании зависимости начальной скорости реакции от концентрации СРС (метод начальных скоростей) для рекомбинантной оксидазы дрожжей Trigonopsis variabilis (TvDAAO) дикого типа и ее трех мутантных форм с точечными заменами остатка Met на остаток Leu в положениях 104, 156 и 209, а также четверного мутанта TvDAAORDAF. Показано, что у точечных мутантов введенные замены в первую очередь приводят к уменьшению константы Михаэлиса. Наибольшее увеличение каталитической эффективности k_кат/K_M (39%) наблюдалось для мутанта с заменой Met156Leu. В случае четверного мутанта константа Михаэлиса у фермента с СРС возросла в четыре раза по сравнению с ферментом дикого типа, а каталитическая эффективность практически не изменилась за счет четырехкратного увеличения каталитической константы.
Ключевые слова: Оксидаза D-аминокислот, Trigonopsis variabilis, рекомбинантный фермент, мутантные формы, окисление цефалоспорина С, кинетические параметры.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2019, том 60, № 4, стр. 226-231