Д.А. Алтухов, Ю.К. Агапова, А.В. Власкина, Д.А. Корженевский,А.Ю. Николаева, А.М. Франк-Каменецкая, Э.В. Бочаров, Т.В. Ракитина
Получение рекомбинантных HU-белков из S. Melliferum и
M. Gallisepticum и их комплексов с дцДНК для структурных ЯМР-исследований
Реферат
Cоздана высокоэффективная система бактериальной экспрессии и
протокол очистки рекомбинантных HU-белков, меченных изотопами 13C и 15N,
из микоплазм S. Melliferum (HUSpm) и M. gallisepticum (HUMgal),
пригодных для структурных исследований с помощью ЯМР-спектроскопии высокого
разрешения, а также подобраны условия проведения ЯМР-экспериментов и получены
обзорные двумерные гетероядерные ЯМР-спектры 1H/15N-HSQC
и 1H/13С-HSQC-CT свободных форм HU-белков (HUSpm и
HUMGal), а также спектр 1H/15N-HSQC HUSpm в присутствии
ДНК-дуплекса. Разработанные методики универсальны, применимы для других
представителей семейства HU-белков, позволяют проводить структурно-динамические
исследования белков в свободной форме и изучение их конформационных перестроек
при образовании комплексов с различными видами ДНК-дуплексов или ингибиторами
ДНК-связывания.
Ключевые слова: ДНК-связывание, гистоноподобные HU-белки,
бактериальная система экспрессии, ЯМР-спектроскопия.
Полный текст статьи в формате PDF
Вестник Московского Университета.
Химия 2016, том 57, № 4, стр. 227-234
Copyright (C) Химический факультет МГУ, 2016
|