А.В. Степашкина, С.С. Савин, О.Е. Скиргелло, В.И. Тишков

Экспрессия и характеристика мутантных форм пенициллинацилазы из Alcaligenes faecalis

Секвенирование шести плазмид с геном пенициллинацилазы из Alcaligenes faecalis VKM B1518 (AfПА) показало наличие в гене случайных мутаций, возникших при проведении полимеразной цепной реакции. Проведена экспрессия в клетках E. coliшести мутантных AfПА и фермента дикого типа. Анализ активности мутантных AfПА в клетках E. coli свидетельствует о влиянии ряда аминокислотных замен на уровень экспрессии гена AfПА, а также на скорость роста клеток. Очищены четыре мутантных AfПА, изучены их каталитические свойства и температурная стабильность. Показано, что исследованные аминокислотные замены не влияют на величину каталитической эффективности. Замены βQ133R и βK184E (мутант AfПА М2) на термостабильность фермента в пределах ошибки эксперимента не влияли, а в случае мутантов AfПА М4 (βY90H), М5 (αD132G, βR97C) и М6 (αV5E, αN183S и βE439G) константа скорости инактивации по сравнению с ферментом дикого типа увеличилась в 2,4, 2,75 и 8,3 раза соответственно.
Ключевые слова: пенициллинацилаза, Alcaligenes faecalis, неупорядоченный мутагенез, экспрессия, каталитические свойства, термостабильность.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2014, том 55, № 2, стр. 113-119