Т.А. Богуш, А.С. Шатурова, Е.А. Дудко, Э.Э Жураев, Б.Е. Полоцкий, Г.В. Унгиадзе, М.И. Давыдов
Количественная
иммунофлуоресцентная оценка с использованием проточной цитофлуориметрии
экспрессии эстрогеновых рецепторов β в солидных опухолях человека
Реферат
Проведена адаптация условий имунофлуоресцентного анализа
эстрогеновых рецепторов β(ЭРβ) с использованием проточной
цитофлуориметрии (ПЦФ) и моноклональных антител к ЭРβ фирмы “Abcam” (клон 14С8),
специфических по отношению к N-терминальному домену белка
ЭРβ человека. Показана возможность фиксации клеток 4%-м
раствором формальдегида и варьирования числа клеток в суспензии, что позволяет
исследовать не только образцы опухоли, получаемые во время хирургических
операций, но и при эндоскопическом обследовании больных и биопсии опухоли. К
использованию в клинической практике рекомендована продолжительность инкубации
с первичными антителами в течение ночи (15– 20 ч.), а с вторичными – 1,5 ч,
что оправдано с точки зрения большей чувствительности метода, сокращения
расхода антител и удобства для персонала. Для контроля активности антител в
качестве референсной культуры рекомендованы клетки рака молочной железы линии
MCF-7 и диапазон концентраций антител 0,06; 1,2 и 2,5 мкг/мл. Для
количественной оценки частоты экспрессии ЭРbв солидных опухолях
человека обосновано использование антител в области концентраций 1,2; 2,5 и 5
мкг/мл, которая включает область линейной зависимости флуоресцентного
специфического окрашивания от концентраций антител и область достижения
окрашивания всех клеток в исследуемой клеточной суспензии, а следовательно, и
в исследуемой опухоли.
Полный текст статьи в формате PDF
Вестник Московского Университета.
Химия 2011, том 52, № 4, стр. 305-312
Copyright (C) Химический факультет МГУ, 2011
|