Г.Ю. Ломакина, Ю.А. Модестова, Н.Н. Угарова

Повышение термостабильности люциферазы светляков Luciola mingrelica сайт-направленным мутагенезом неконсервативных остатков цистеина 62 и 146

Методом сайт-направленного мутагенеза получены мутантные формы люциферазы светляков L. mingrelica с единичными заменами Cys62Ser и Cys146Ser. Мутации не повлияли на каталитическую активность фермента и спектры флуоресценции. Определены константы скорости быстрой (k₁)и медленной (k₂)стадии термоинактивации для исходного и мутантных ферментов при 37°С в отсутствие и в присутствии 12 мМ дитиотреитола (ДТТ). Показано увеличение стабильности мутантных форм люциферазы в несколько раз по сравнению с исходным ферментом – в присутствии ДТТ константа k₂ дляисходного фермента снижается в три раза, а для мутантных форм константы k₁ и k₂практически не изменяются. Сделан вывод о том, что остатки Cys62 и Cys146 играют заметную роль в процессе инактивации люциферазы и их замены на Ser приводят к стабилизации фермента.

  Полный текст статьи в формате PDF

Вестник Московского Университета.
Химия 2008, том 49, № 2, стр. 81-85